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实验室简明评估颖泰三号抑菌效果报告

时间:2021-11-19 浏览:443次
详细说明

颖泰三号主(zhu)要成分是枯草(cao)芽孢杆菌(jun)(jun)(jun)及产生的枯草(cao)菌(jun)(jun)(jun)肽(tai)抗(kang)菌(jun)(jun)(jun)肽(tai),枯草(cao)菌(jun)(jun)(jun)肽(tai)由37个(ge)(ge)氨基酸组(zu)成,结(jie)构(gou)中含有(you)两个(ge)(ge)α-螺旋、一个(ge)(ge)连接环和两个(ge)(ge)二硫键。其成分明确,结(jie)构(gou)清晰,可有(you)效杀灭产气荚膜(mo)梭菌(jun)(jun)(jun)、金黄色葡萄球菌(jun)(jun)(jun)和化脓性(xing)链(lian)球菌(jun)(jun)(jun)等革兰氏(shi)阳性(xing)菌(jun)(jun)(jun)。

通过不同方(fang)法检测颖泰三号(hao)和其他同类芽孢杆菌(jun)(jun)(jun)产(chan)品的(de)抑(yi)菌(jun)(jun)(jun)性能,评估不同产(chan)品对产(chan)气荚膜梭菌(jun)(jun)(jun)和金黄色葡萄球菌(jun)(jun)(jun)等革(ge)兰氏阳性菌(jun)(jun)(jun)的(de)抑(yi)菌(jun)(jun)(jun)效(xiao)果(guo),为饲料厂在(zai)替代(dai)抗生素方(fang)面(mian)的(de)应用提供参考依据。





试验(yan)一:比浊法(共培养)测定
颖泰三号的抑(yi)菌(jun)率

试验目的:

通过比浊法测定颖泰三号、国产地(di)衣芽孢(bao)杆菌(jun)和进(jin)口(kou)枯草芽孢(bao)杆菌(jun)等3个产品发(fa)酵(jiao)液不同浓(nong)度(du)下(xia)对产气荚膜梭菌(jun)CVCC2027、金(jin)黄色葡萄球菌CMCC26003等2种细(xi)菌(jun)的抑菌(jun)率,评估不同产品(pin)的抑菌(jun)效果。


试(shi)验方法(fa):参照(zhao)(zhao)药典(dian)方法(fa),分(fen)别取(qu)0.1mL产气荚(jia)膜梭菌CVCC2027、金黄色葡萄(tao)球菌CMCC26003细菌菌液(ye)(ye),加入含10mL LB液(ye)(ye)体培养基的(de)灭菌试(shi)管中,再(zai)将制备好的(de)3个待(dai)测(ce)样品(pin)溶液(ye)(ye)分(fen)别按(an)照(zhao)(zhao)1%、3%、6%的(de)浓度(0.1mL、0.3mL、0.6mL)加入前述(shu)试(shi)管中。同时设立空(kong)白(bai)对照(zhao)(zhao)(试(shi)管内只加LB液(ye)(ye)体培养基和细菌菌液(ye)(ye))。

37℃培养,24小(xiao)时后测(ce)定(ding)各试管菌液OD600nm(用(yong)LB培(pei)养基(ji)调零),记(ji)录、计算各产品(pin)不同浓度下的抑菌率。

抑菌率(lv)=(A-A)/A*100%

注:A空(kong):空白对照组(zu)24h OD值;

  A:样品组24h OD值(zhi)。


试验(yan)结果如下:

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图1.1 颖泰(tai)三号(hao)和其他(ta)芽孢杆菌产品对2种细(xi)菌的抑(yi)菌率


试验图片(每个图片上的试管从左至右依次为:1%、3%、6%、对照)如下:

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图(tu)1.2 颖(ying)泰(tai)三(san)号(hao)对2种细菌的抑菌效果


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1.3 国产地衣芽孢杆菌对2种细菌的抑菌效果


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图(tu)1.4 进口枯草芽孢杆(gan)菌(jun)对2种(zhong)细菌(jun)的抑(yi)菌(jun)效果

结(jie)论:

针对产气荚膜梭菌CVCC2027,国产地衣芽孢杆菌效果最弱,抑菌率低于90%,在6%最大浓度下,进口枯草芽孢杆菌抑菌率为91.2%,颖泰三号1%浓度下,抑菌率即达到99.6%,远高于其他2种产品;针对金黄色葡萄球菌 CMCC26003,颖泰三号效果最优,3%浓度下,抑菌率为97.9%,为国产地衣芽孢杆菌的1.96倍,进口枯草芽孢杆菌产品无抑菌效果。


试验二(er):打孔法测定颖泰三(san)号对产气(qi)荚膜梭菌(jun)的最(zui)小抑(yi)菌(jun)浓度
试验目的:通过打孔法测定颖泰三号、国产地衣芽孢杆菌和进口枯草芽孢杆菌等3个产品对5株产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度,评估不同产品的抑菌效果。

试(shi)验方法:将(jiang)3个(ge)样(yang)品(pin)益(yi)生菌活化,于LB培养(yang)基中37℃培养(yang)16h,之后(hou)将(jiang)各产品(pin)发酵液(ye)离心,取其上清液(ye),用(yong)无菌水2倍(bei)梯度(du)稀释依次制(zhi)备(bei)成1/2、1/4、1/8、……、1/256的样(yang)品(pin)溶液(ye),备(bei)用(yong)。

将(jiang)各细菌(jun)菌(jun)液(ye)加入(ru)到TSC培(pei)(pei)养(yang)基中(zhong),之后倒入(ru)放有牛(niu)津杯的(de)素琼脂培(pei)(pei)养(yang)皿中(zhong),取出牛(niu)津杯,吸取150μL不同浓(nong)度的(de)各样品溶液(ye)加入(ru)到相应(ying)的(de)孔(kong)内,同时设立灭菌(jun)水为空白对(dui)照,并在(zai)培(pei)(pei)养(yang)皿上做好标(biao)记。

将加过样(yang)的培养(yang)皿移入37℃培养(yang)箱中培养(yang)16h,测量(liang)、记录抑菌圈(quan)。


试验结果如下:
表2.1 颖泰三号和其他芽孢杆菌产品对5株产气荚膜梭菌的抑菌圈对比

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注:1.抑菌圈直径单位:mm,“—”表示没有抑菌圈;2. CVCC2027购自于中国兽医药品监察所,猪产气荚膜梭菌1和2,鸡产气荚膜梭菌1和2分别分离自不同的猪场和鸡场,下同。

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3种产(chan)品对不同产(chan)气(qi)荚膜(mo)梭菌(jun)的MIC:

表(biao)2.2 颖泰三号和其他芽孢杆菌(jun)产(chan)(chan)品(pin)对5种产(chan)(chan)气荚膜梭菌(jun)的MIC 

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本次试验各孔样品设置如下:

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试(shi)验图片(标(biao)注(zhu)浓度样品(pin)孔处为各(ge)产(chan)品(pin)MIC位置圈)如下:

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2.1 不同产品对产气荚膜梭菌CVCC2027的抑菌圈

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2.2 不同产品对猪产气荚膜梭菌1的抑菌圈


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2.3 不同产品对猪产气荚膜梭菌2的抑菌圈


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2.4 不同产品对鸡产气荚膜梭菌1的抑菌圈


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2.5 不同产品对鸡产气荚膜梭菌2的抑菌圈

结论:

同(tong)等浓度下,颖(ying)泰(tai)三号对(dui)5种产气荚膜(mo)梭(suo)菌的抑(yi)(yi)菌圈直径最大,在1/64浓度时,抑(yi)(yi)菌圈直径最低(di)为(wei)16.3mm,属极敏(min)感抗菌物(wu)质;颖(ying)泰(tai)三号对(dui)产气荚膜(mo)梭(suo)菌CVCC2027的MIC值(zhi)(zhi)为(wei)≤1/256,对(dui)另外四株(zhu)临(lin)床分离型菌株(zhu)的MIC值(zhi)(zhi)均为(wei)1/128,其MIC值(zhi)(zhi)最低(di),抑(yi)(yi)菌效果最好(hao)。



注(zhu):以上数据(ju)均来自农(nong)业农(nong)村部(bu)饲用(yong)抗生素替代技术重点实验室(shi)。


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综上所述
通过不同的检测方法评估颖泰三号和其他同类芽孢杆菌产品的抑菌效果,在杀灭产气荚膜梭菌和金黄色葡萄球菌等对养殖业危害较大的环境常在菌上,颖泰三号抑菌率、抑菌圈和MIC均优于其他同类产品,在饲料禁抗,养殖减抗大背景下,颖泰三号可有效替代抗生素,减少疾病发生率,提高生产成绩。

撰稿:成(cheng)鹏(peng)、李洪宇

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